實驗開始前(qian)，各試(shi)劑均應(ying)(ying)平衡至室溫(wen)(試(shi)劑不能直接在37℃溶解)；試(shi)劑或樣品稀(xi)釋(shi)時(shi)，均需混勻，混勻時(shi)盡(jin)量避免(mian)起泡。實驗前(qian)應(ying)(ying)預測樣品含量，如樣品濃度過(guo)高時(shi)，應(ying)(ying)對樣品進行稀(xi)釋(shi)，以使稀(xi)釋(shi)后的(de)樣品符合試(shi)劑盒的(de)檢測范圍(wei)，計算時(shi)再(zai)乘以相應(ying)(ying)的(de)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數。

1.加(jia)(jia)(jia)樣(yang)：分(fen)別(bie)(bie)設空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)、標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)孔(kong)(kong)(kong)、待測(ce)樣(yang)品孔(kong)(kong)(kong)。空(kong)白孔(kong)(kong)(kong)加(jia)(jia)(jia)樣(yang)品稀釋液100μl，余孔(kong)(kong)(kong)分(fen)別(bie)(bie)加(jia)(jia)(jia)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品或待測(ce)樣(yang)品100μl，注意(yi)不要(yao)有氣泡，加(jia)(jia)(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)(jia)(jia)于酶標(biao)(biao)板(ban)孔(kong)(kong)(kong)底(di)部，盡量不觸及孔(kong)(kong)(kong)壁，輕輕晃(huang)動混勻，酶標(biao)(biao)板(ban)加(jia)(jia)(jia)上蓋或覆膜，37℃反應120分(fen)鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品溶液。

2.棄去液(ye)(ye)體，甩干(gan)，不用洗滌。每(mei)孔(kong)加檢測溶液(ye)(ye)A工(gong)作液(ye)(ye) 100μl(在使(shi)用前一小時內(nei)配制)，酶(mei)標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.溫育60分(fen)鐘(zhong)后，棄去孔內液體(ti)，甩干(gan)，洗板3次，每(mei)次浸泡1-2分(fen)鐘(zhong)，大約400μl/每(mei)孔，甩干(gan)(也可輕拍將孔內液體(ti)拍干(gan))。

4.每孔加檢測溶(rong)液(ye)B工作液(ye)(同檢測A工作液(ye)) 100μl，酶標板加上覆膜37℃反(fan)應60分鐘。

5.溫育60分(fen)鐘后，棄去孔內液(ye)體(ti)，甩(shuai)(shuai)干(gan)，洗板(ban)5次，每(mei)次浸泡(pao)1-2分(fen)鐘，350μl/每(mei)孔，甩(shuai)(shuai)干(gan)(也可輕(qing)拍將孔內液(ye)體(ti)拍干(gan))。

6.依序每孔加(jia)底物溶液90μl，酶標(biao)板(ban)加(jia)上覆膜37℃避(bi)光顯(xian)色(30分鐘內，此(ci)時肉眼可見標(biao)準品的(de)前3-4孔有明(ming)顯(xian)的(de)梯度(du)蘭色，后3-4孔梯度(du)不明(ming)顯(xian)，即(ji)可終止)。

7.依序每(mei)孔加終(zhong)止(zhi)溶(rong)液(ye)(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應，此時(shi)藍色立(li)轉黃色。終(zhong)止(zhi)液(ye)(ye)的(de)加入(ru)順序應盡(jin)量與底物液(ye)(ye)的(de)加入(ru)順序相同。為(wei)了保(bao)證實(shi)驗結果的(de)準(zhun)確性(xing)，底物反(fan)應時(shi)間到后應盡(jin)快加入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)(ye)。

8.用酶聯(lian)儀在(zai)(zai)450nm波長(chang)依序(xu)測量各孔的光密度(OD值)。 在(zai)(zai)加終止液后(hou)立即進行檢測。

注意事項
IgG,大鼠免疫球蛋白GELISA試劑盒代測實驗注意事項：

1.試劑準備(bei)：所有試劑都必須在(zai)使用(yong)前達到(dao)室溫，使用(yong)后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中(zhong)請使用(yong)一次性的吸頭(tou)，避(bi)免交叉污染。

2.加(jia)樣：加(jia)樣或加(jia)試劑時，請注意在吸取標(biao)(biao)本 / 標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)，酶(mei)結合物(wu)或底(di)物(wu)時，個(ge)孔與(yu)*后一(yi)個(ge)孔加(jia)樣之間(jian)(jian)的(de)時間(jian)(jian)間(jian)(jian)隔如果太大(da)，將會導致不同的(de) “預(yu)孵育"時間(jian)(jian)，從(cong)而明顯地影響到測量值的(de)準(zhun)確性(xing)及重復性(xing)。一(yi)次加(jia)樣時間(jian)(jian)(包括標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)及所有樣品(pin))控制在10分鐘內，如標(biao)(biao)本數量多，推(tui)薦使用(yong)多道移液器(qi)加(jia)樣。

3.孵育(yu)(yu)：為防止樣品蒸發，試(shi)驗時將反應(ying)(ying)板放于(yu)鋪有濕布(bu)的密閉盒內，酶標(biao)板加上蓋或覆膜，以(yi)避(bi)免液(ye)體蒸發；洗板后應(ying)(ying)盡快進行下步操作，任何時侯都應(ying)(ying)避(bi)免酶標(biao)板處于(yu)干(gan)燥狀(zhuang)態;同時應(ying)(ying)嚴(yan)格遵(zun)守給定(ding)的孵育(yu)(yu)時間和溫度。

4.洗(xi)滌(di)：洗(xi)滌(di)過程中反應孔(kong)中殘(can)留的洗(xi)滌(di)液應在(zai)濾(lv)紙(zhi)上充分拍(pai)干，勿將濾(lv)紙(zhi)直接放入(ru)反應孔(kong)中吸(xi)水，同時(shi)要消除板(ban)底(di)殘(can)留的液體和(he)手指印，避免影響*后的酶(mei)標儀讀數。

5.試(shi)劑(ji)配(pei)制(zhi)：Detection A及(ji)Detection B在使(shi)用前(qian)請(qing)手(shou)甩(shuai)幾下(xia)或少時離心處理，以使(shi)管壁或瓶蓋(gai)的(de)液(ye)(ye)(ye)(ye)體沉積到(dao)管底。標(biao)(biao)準品(pin)、檢測溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)A工作液(ye)(ye)(ye)(ye)、檢測溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)B工作液(ye)(ye)(ye)(ye)請(qing)依據(ju)所需的(de)量配(pei)置(zhi)使(shi)用，并使(shi)用相應的(de)稀(xi)(xi)釋液(ye)(ye)(ye)(ye)配(pei)制(zhi)，不能混淆(xiao)。請(qing)精確(que)配(pei)置(zhi)標(biao)(biao)準品(pin)及(ji)工作液(ye)(ye)(ye)(ye)，盡量不要(yao)微(wei)量配(pei)置(zhi)(如(ru)吸取檢測溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)A時，一次不要(yao)小于10μl)，以避免由于不準確(que)稀(xi)(xi)釋而(er)造成的(de)濃度誤(wu)差(cha)；請(qing)勿重復使(shi)用已稀(xi)(xi)釋過的(de)標(biao)(biao)準品(pin)、檢測溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)A工作液(ye)(ye)(ye)(ye)或檢測溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)B工作液(ye)(ye)(ye)(ye)。

6.反應(ying)時間的(de)控制：加入底物后請定時觀(guan)察反應(ying)孔的(de)顏色(se)變化(比如(ru)，每隔10分鐘)，如(ru)顏色(se)較深，請提(ti)前加入終止(zhi)液終止(zhi)反應(ying)，避免反應(ying)過強從而影響酶標儀光(guang)密度(du)讀數。

7.底物：底物請避(bi)(bi)光保(bao)存(cun)，在儲存(cun)和(he)溫育時(shi)避(bi)(bi)免強光直接(jie)照射。建(jian)議(yi)檢測(ce)樣品時(shi)均設(she)雙孔(kong)測(ce)定，以(yi)保(bao)證(zheng)檢測(ce)結果的(de)準確性。

如(ru)標(biao)本中待測物質含量過高(gao)，請先稀釋后再測定，計(ji)算時請*后乘以稀釋倍數。

公司常見產品：

人常見ELISA試劑盒系列(lie)

人：IL-1、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-2R、IL-27、IL-23、IL-17、IL-18、IL-9、IL-8、IL-6、IL-5、IL-4、IL-2、IL-13、IL-11、IL-10、IL-12P70、IL-12P40、IFN-ω、IFN-β、IFN-α、 IFN-γ、TNF-β、TNF-α、sICAM-1、LEP、MMP-3等(deng)

大鼠常(chang)見ELISA試劑盒系(xi)列

大鼠：TNF-α、IL-1β、IL-7、IL-32、IL-21、IL-27、IL-23、IFN-γ、TGF-α、TGF-β1等(deng)

小鼠常見ELISA試劑盒系列

小鼠：IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-13、IL-10、IL-11、IL-17、TNF-α、TNF-β、VEGF、TGF-β1等

另(ling)有兔、豬、猴(hou)、雞(ji)、鴨、羊、植物等多種(zhong)(zhong)種(zhong)(zhong)屬ELISA試(shi)劑盒，所有試(shi)劑盒經過充分驗證，保證有效且(qie)重復(fu)性(xing)佳。

更新時間：2024/2/19 17:04:24