Elisa試驗(yan)是一種敏感性(xing)高(gao)，特異性(xing)強，重(zhong)復性(xing)好(hao)的(de)實驗(yan)診斷(duan)(duan)方法。由于其試劑(ji)穩定、易保(bao)存，操(cao)作簡便，結果(guo)判斷(duan)(duan)較客觀等因(yin)素，已(yi)廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)在免疫學(xue)檢(jian)驗(yan)的(de)各(ge)領域中。依次加入標本、標準(zhun)品(pin)、HRP標記的(de)檢(jian)測抗體，經過溫育(yu)并(bing)(bing)徹底洗滌。用(yong)底物TMB顯色(se)，TMB在過氧化(hua)物酶的(de)催化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)，并(bing)(bing)在酸的(de)作用(yong)下轉化(hua)成*終的(de)黃(huang)色(se)。用(yong)酶標儀在450nm 波(bo)長下測定吸光度(du)(du)（OD 值），計算樣品(pin)濃度(du)(du)。

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.  血(xue)清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過(guo)程中避(bi)免任何細(xi)胞(bao)(bao)刺激，收(shou)集血(xue)液后，3000轉離心10分鐘將血(xue)清和紅(hong)細(xi)胞(bao)(bao)迅速小(xiao)心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽(yan)或其他抗凝。3000轉離(li)心(xin)30分鐘取上(shang)清。

3.  細胞上(shang)清液：3000轉離(li)心10分鐘(zhong)去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻(yun)漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分(fen)鐘取上清。

5.  保(bao)存：如果樣本收集(ji)后不及時檢測，請按一次用(yong)量分裝，凍存于-20℃，避免反(fan)復凍融，在室溫下解凍并確保(bao)樣品均勻地(di)充分解凍。

自備物品

1.     酶標(biao)儀（450nm）

2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒溫箱

注意事項
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使(shi)用前室溫平衡20分(fen)鐘。從冰箱取(qu)出的濃縮洗滌(di)液(ye)會有結晶，這屬(shu)于正常現象，水(shui)浴加熱使(shi)結晶完全溶解后再使(shi)用。

2.  實驗中不用的板(ban)條應立即放回自封袋(dai)中，密封（低溫(wen)干燥）保存。

3.  標(biao)準品稀釋液即可(ke)視為陰(yin)性(xing)對照或者空(kong)白(bai)；預處理后的樣(yang)本無(wu)需稀釋，直接(jie)取10μL加樣(yang)即可(ke)。

4.  嚴格按照(zhao)說(shuo)明(ming)書中標(biao)明(ming)的時(shi)間、加液量及順序進行溫育操(cao)作。

5.  所有液體(ti)組(zu)分(fen)使(shi)用前(qian)充分(fen)搖勻。

試劑盒組成

注：標準品用標準品稀釋(shi)液依次稀釋(shi)為(wei)：80、40、20、10、5、2.5 pg/ml

試劑的準備

 20×洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)(ye)的(de)稀(xi)釋：蒸餾水按(an)1：20稀(xi)釋，即1份的(de)20×洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)(ye)加19份的(de)蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗(xi)(xi)板(ban)：甩盡孔內(nei)液(ye)體，每孔加滿洗(xi)(xi)滌(di)液(ye)，靜置1min后甩盡孔內(nei)液(ye)體，在吸(xi)水紙上(shang)拍(pai)干，如(ru)此洗(xi)(xi)板(ban)5次。

2.  自動洗板機：每孔注(zhu)入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作流程
BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒操作步驟

1.  從室(shi)溫平衡20min后的鋁箔袋中(zhong)取(qu)出所需板條，剩余(yu)板條用(yong)自封(feng)(feng)袋密封(feng)(feng)放回4℃。

2.  設置標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)孔和(he)樣本孔，標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)孔各加不同濃度的標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)50μL；

3.  待(dai)測樣本(ben)(ben)孔先加待(dai)測樣本(ben)(ben)10μL，再加樣本(ben)(ben)稀釋液40μL；

4.  隨后標準(zhun)品孔(kong)和樣(yang)本孔(kong)中每(mei)孔(kong)加入辣(la)根過氧(yang)化物酶（HRP）標記(ji)的(de)檢測(ce)抗(kang)體100μL，用封板膜(mo)封住(zhu)反應孔(kong)，37℃水浴(yu)鍋(guo)或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去(qu)液體，吸(xi)水紙上(shang)拍干，每孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液，靜(jing)置1min，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，吸(xi)水紙上(shang)拍干，如此(ci)重復洗(xi)板5次（也(ye)可用洗(xi)板機洗(xi)板）。

6.  每孔加(jia)入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  ;每孔加入終止液(ye)50μL，15min內，在450nm波長處測(ce)定各孔的OD值(zhi)。

結果判斷

 繪(hui)制(zhi)標(biao)(biao)準曲線：在Excel工作(zuo)表中，以標(biao)(biao)準品(pin)(pin)濃度作(zuo)橫(heng)坐(zuo)標(biao)(biao)，對(dui)應OD值作(zuo)縱坐(zuo)標(biao)(biao)，繪(hui)制(zhi)出(chu)標(biao)(biao)準品(pin)(pin)線性回歸曲線，按曲線方程計算各(ge)樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性(xing)：標準品線性(xing)回(hui)歸(gui)與預(yu)期(qi)濃度相關系數(shu)R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏(min)度：檢測濃(nong)度小(xiao)于1.0pg/ml。

3.  特異性：不與其(qi)它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復(fu)性：板內、板間變異系數均(jun)小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個月

BIM試劑盒,大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒免責聲明

1.   試劑盒僅(jin)供研究使用(yong)(yong)，不(bu)得用(yong)(yong)于臨床(chuang)實(shi)(shi)驗或人(ren)體(ti)實(shi)(shi)驗，否則所產生的一切后果，由實(shi)(shi)驗者承擔(dan)，本(ben)公司概不(bu)負(fu)責(ze)。

2.   嚴格按照說明(ming)書操(cao)(cao)作，實驗者違反(fan)說明(ming)書操(cao)(cao)作，后(hou)果由(you)實驗者承擔。

更新時間：2024/4/19 9:07:54