品(pin)牌: 恒遠生(sheng)物貨號: HYCC30031
中文名稱: 大鼠胚胎心肌細胞
規格: T25
形態特性(xing): 上皮樣細胞(bao)生長
生(sheng)長特性: 貼(tie)壁生(sheng)長
培(pei)養(yang)條件:DMEM+10%FBS
傳(chuan)代(dai)方法: 1:2~1:6傳(chuan)代(dai)；2~3天(tian)換(huan)液1次。
凍(dong)存條(tiao)件: 無血清細胞凍(dong)存液
特征(zheng)特性(xing)：該(gai)細(xi)胞由(you)Kimes B和(he)Brandt B從BD1X大鼠胚(pei)胎(tai)心臟組織的(de)克隆(long)細(xi)胞株亞克隆(long)得(de)到；表現出許(xu)多骨(gu)骼肌的(de)特性(xing)。這個細(xi)胞株中(zhong)的(de)成肌細(xi)胞能(neng)融合(he)形成多核的(de)肌管，并對(dui)乙酰膽堿的(de)刺激發生(sheng)反應。如果培(pei)養基中(zhong)的(de)血清濃度(du)下降到1%，融合(he)很快發生(sheng)。
一、細胞收到(dao)后處理
細(xi)胞(bao)在培養(yang)(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)(yang)至(zhi)良好(hao)狀(zhuang)態后(hou)(hou)灌滿培養(yang)(yang)液(ye)并(bing)封(feng)好(hao)瓶(ping)口是細(xi)胞(bao)運輸的(de)(de)(de)(de)常見辦法。收(shou)到細(xi)胞(bao)回到自(zi)己的(de)(de)(de)(de)實驗室后(hou)(hou)，先打開(kai)外(wai)包裝(zhuang)，用75%酒精噴灑整(zheng)個瓶(ping)消毒(du)后(hou)(hou)放到超凈臺內，嚴格(ge)無(wu)菌操(cao)作，培養(yang)(yang)箱(xiang)靜置2-4小時(shi)。鏡(jing)下(xia)觀察：未超過(guo)80%匯合度(du)時(shi)，可(ke)將瓶(ping)裝(zhuang)的(de)(de)(de)(de)培養(yang)(yang)液(ye)收(shou)集至(zhi)離心管中(zhong)，加入6ml培養(yang)(yang)基，放入37℃、孵箱(xiang)培養(yang)(yang)；超過(guo)80%匯合度(du)時(shi)，根(gen)據情(qing)況傳代(dai)或(huo)者凍(dong)存，具(ju)體(ti)操(cao)作見細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)步驟。（注意發貨的(de)(de)(de)(de)是密封(feng)培養(yang)(yang)瓶(ping)的(de)(de)(de)(de)話，處理完后(hou)(hou)放入培養(yang)(yang)箱(xiang)培養(yang)(yang)記得培養(yang)(yang)瓶(ping)蓋子擰松，傳代(dai)后(hou)(hou)建(jian)議(yi)一瓶(ping)用原(yuan)瓶(ping)里面的(de)(de)(de)(de)培養(yang)(yang)基，另(ling)外(wai)一瓶(ping)用自(zi)己配的(de)(de)(de)(de)培養(yang)(yang)基），若是5%CO2的(de)(de)(de)(de)培養(yang)(yang)箱(xiang)，可(ke)用密封(feng)培養(yang)(yang)瓶(ping)，擰緊(jin)瓶(ping)蓋后(hou)(hou)放入5%CO2培養(yang)(yang)箱(xiang)，48H內要換液(ye)一次。
二(er)、細胞(bao)培養步驟
1.培養皿(min)/瓶(ping)用槍(qiang)頭或移液管吸(xi)去原培養液。
2.無菌PBS或無菌生(sheng)理鹽水(shui)洗滌(di)3次（按培養(yang)體積加入）。
3.加入適量胰(yi)酶(mei)(mei)消化(hua)適當時間(jian)（一(yi)(yi)般(ban)胰(yi)酶(mei)(mei)為(wei)0.25%；9cm/10cm培(pei)養皿和25cm培(pei)養瓶，一(yi)(yi)次加入1mL胰(yi)酶(mei)(mei)。消化(hua)時間(jian)視細胞類型等多種情況綜(zong)合(he)考慮(lv)，一(yi)(yi)般(ban)如果是細胞株(zhu)，非(fei)原代培(pei)養，消化(hua)1－2分鐘足矣）。
4.用槍頭吹打數十(shi)次（視細(xi)(xi)胞類型而定。一般細(xi)(xi)胞株30－50次吧(ba)，耗時一般2分(fen)鐘左右）。
5. 加入適量體積wanquan培(pei)養(yang)基終止胰酶消化(hua)（如果是9cm/10cm培(pei)養(yang)皿(min)和(he)25cm培(pei)養(yang)瓶，可以(yi)加入1mL培(pei)養(yang)基；現在培(pei)養(yang)瓶（皿(min)）里有(you)2mL溶液(ye)）。
6.現在可(ke)(ke)以將(jiang)溶液(ye)(ye)進行(xing)分瓶(ping)（2mL）。如果是細胞株，直接均(jun)分到兩個培(pei)(pei)(pei)養瓶(ping)（皿）里。如果是原(yuan)代培(pei)(pei)(pei)養，可(ke)(ke)以根據(ju)消化時間(jian)來(lai)對(dui)細胞進行(xing)分離；因此可(ke)(ke)以將(jiang)溶液(ye)(ye)（2mL）都轉(zhuan)入(ru)新的(de)培(pei)(pei)(pei)養瓶(ping)（皿）。
7.將兩個培養(yang)(yang)瓶（皿(min)）補足培養(yang)(yang)基(ji)到正常體積（果是9cm/10cm培養(yang)(yang)皿(min)和25cm培養(yang)(yang)瓶，為5mL培養(yang)(yang)液）。
8.鏡下觀察(cha)。剛剛傳代細胞還沒貼(tie)(tie)壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之(zhi)內(nei)會貼(tie)(tie)壁，如(ru)果已經貼(tie)(tie)壁，根據(ju)細胞類型(xing)有不同的形態，但通(tong)常都不是圓形。
9.鏡下(xia)觀察無(wu)誤之后，再放(fang)入細胞(bao)培養(yang)箱。培養(yang)瓶(ping)（皿）放(fang)入之，可(ke)以(yi)用消毒酒精(jing)先(xian)擦一下(xia)。
10.傳代(dai)之(zhi)后，第二天細胞換(huan)液一(yi)次。當然，也(ye)可(ke)以視情況(kuang)而(er)定。
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