在ELISA檢測系(xi)統的(de)關(guan)鍵(jian)要素中，包(bao)被(bei)原(yuan)的(de)性質(zhi)很重要，蛋白(bai)濃度(du)，是(shi)(shi)否(fou)降解，這(zhe)關(guan)系(xi)到你做(zuo)出的(de)抗(kang)體可不(bu)可以被(bei)其(qi)識別，所以保留抗(kang)原(yuan)很重要，elisa試(shi)劑盒我(wo)做(zuo)重組(zu)蛋白(bai)時，一(yi)定要在冰(bing)浴(yu)下緩慢融化就是(shi)(shi)這(zhe)個道理。封鎖就是(shi)(shi)讓大量不(bu)相(xiang)關(guan)的(de)蛋白(bai)質(zhi)充填這(zhe)些曠地空閑，從而排斥(chi)ELISA后的(de)步驟中干擾物質(zhi)的(de)再(zai)吸附。但有時因(yin)為試(shi)驗的(de)需要，包(bao)被(bei)原(yuan)的(de)特殊性也可能采用中性的(de)緩沖溶液來包(bao)。
操(cao)作(zuo)注意(yi)：
(1) 試劑盒保(bao)存在2-8℃，使(shi)用室溫平(ping)衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗(xi)滌液會有結(jie)晶，這(zhe)屬(shu)于正常現象(xiang)，水(shui)浴加熱(re)使(shi)結(jie)晶解后再使(shi)用。
(2) 實驗中不用的板條應(ying)立即放回自封袋中，密(mi)封(低(di)溫(wen)干燥)保(bao)存。
(3) 嚴格按(an)照說(shuo)明(ming)書中標明(ming)的(de)時間(jian)、加(jia)液量及(ji)順序(xu)進行(xing)溫育(yu)操作。
(4) 所有液體組分使用充分搖勻。
試劑盒采用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)一步(bu)夾心法(fa)酶聯免疫吸附試驗(yan)(ELISA)。該法(fa)適于測定(ding)細(xi)胞培養上清(qing)、血(xue)清(qing)、血(xue)漿及組織(zhi)液中的(de)樣本，干(gan)擾小可以(yi)測到每毫升(sheng)納克水(shui)(shui)平的(de)細(xi)胞因子(zi)(或受體(ti))的(de)水(shui)(shui)平。在這種測定(ding)方(fang)法(fa)中有3種必(bi)要的(de)試劑：
①固相的抗(kang)(kang)原或(huo)抗(kang)(kang)體；
②酶標記的抗原或抗體；
③酶作用的底物。
根據ELISA試劑(ji)盒試劑(ji)的(de)(de)(de)來源和(he)標(biao)本(ben)的(de)(de)(de)性狀以及檢(jian)測的(de)(de)(de)具備條件，可設計出(chu)各種不(bu)同類型的(de)(de)(de)檢(jian)測方法。
(1) 雙抗體夾心法；
(2) 雙位點一步法；
(3) 間接法測抗體；
(4) 競爭法；
(5) 捕獲法測IgM抗體(ti)；
(6) 應用親和素和生(sheng)物素。
試劑盒(he)普遍用作非放射性同位素的(de)成鍵化(hua)(hua)驗。在(zai)這種方法(fa)中，通常標準配(pei)體(ti)是固定的(de)，通過(guo)加入溶液相受體(ti)或(huo)蛋白(bai)質(zhi)來使之成鍵。通過(guo)加入與受體(ti)特(te)異性反應(ying)(ying)的(de)抗(kang)(kang)體(ti)來定量成鍵的(de)受體(ti)，而(er)且初抗(kang)(kang)體(ti)的(de)量以(yi)加入第(di)二種能顯色的(de)抗(kang)(kang)體(ti)測(ce)量。第(di)二種抗(kang)(kang)體(ti)能識別抗(kang)(kang)體(ti)的(de)末端，在(zai)其末端的(de)堿性磷酸酯或(huo)過(guo)氧化(hua)(hua)物酶等與酶發生反應(ying)(ying)，從而(er)使溶液顯色。
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